超声波破碎仪在降解检材制备中的应用

摘要

目的：使用Q800R3超声波破碎仪处理提取纯化后的案件生物物证检材DNA制作模拟降解检材样本，比较DNATyperTM 30、VersaPlex 27PY两种扩增试剂盒在扩增案件降解检材时的效果，讨论基因座引物长度不同对降解检材扩增效果的影响。方法：通过测试1ng/ul 2800M在Q800R3超声波破碎仪不同处理时间下和梯度浓度2800M在Q800R3超声波破碎仪在相同处理时间下扩增产物分型图谱中各基因座等位基因变化研究其打断效果及制备模拟降解检材的实验中的参数。设定适当的实验参数，使案件样本制作模拟降解检材，经、DNATyperTM 30两种扩增试剂盒扩增，分析电泳结果。结果：随着打断时间的增加，处理16min后长度大于200bp的基因片段检出峰高逐渐降低，当处理时间大于30分钟，长度大于300bp的基因片段开始出现等位基因丢失。当浓度为0.2ng/ul时，长度大于300bp的片段开始出现等位基因丢失。讨论：Q800R3超声波破碎仪可以应用于模拟降解检材制备，在处理过程中需要反复离心，保证DNA被充分打断。VersaPlex 27PY、DNATyperTM 30两种扩增试剂盒对降解检材的检验效果均较好。引物的设计可以显著影响降解检材的扩增效果，后续针对降解检材的试剂盒研发可以进一步优化引物长度，提高对降解检材的灵敏度。